1992年，一位日本研究人员Higuchi提出了qPCR（Quantitative real-time PCR）技术——在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化来实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过CT值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析的一项技术。经历从研发到市场化，1996年，美国应用生物系统公司ABI推出了首台qPCR仪。

目前，主要通过两种方式对PCR产物进行标记跟踪——荧光染料法与荧光探针法，既可以定量分析，也可以用来定性分析。

根据qPCR检测系统所生成的数据，结合标准曲线和熔解曲线，经过数据处理就可以得到起始模板浓度。

qPCR染料法特点

染料法经济实惠，但是由于染料只要是双链DNA就会与之结合发光，特异性不强，需要做熔解曲线观察其特异性。

在高通量测序实验室中（以血液样本为例），运用核酸提取试剂盒提取出基因组DNA，再将基因组DNA打断、拼接、重组，制备出重塑的DNA模型即基因文库。为了对建库产物进行质量检测，应用的就是qPCR荧光染料技术，该技术属于相对定量方法。

在PCR反应体系中，包含一对引物和一个特异性荧光探针。该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，不发出荧光。PCR扩增时，DNA聚合酶利用酶的外切活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。最终，被qPCR仪监测信号并检出。

根据荧光定量检测系统生成的扩增曲线，读取标本CT值。根据结果判断原则，对每一个标本进行准确的结果判读。

探针法只有在探针结合的片段才能收集信号，具有很好的特异性，但是合成探针成本较高。

目前，国内PCR市场因为新冠疫情带来巨大增量，行业景气度上升。随着疫情防控的发展，暴露出基层检测能力不足的短板，卫健委多次发布政策要求加强实验室建设和增强核酸检测能力。广阔的市场需求和因技术快速迭代升级带来应用范围拓展及成本下降，以及伴随而来的政府支持，PCR市场规模快速增长。PCR行业居于分子诊断黄金赛道，市场规模有望长期高增。虽然数字PCR已经出现，但目前在临床应用上仍处于探索阶段。所以，qPCR技术在未来分子诊断市场中仍然扮演重要角色。